问题解答

　　　如何选择TMB？可溶性vs沉淀性？单组份vs双组份？
　　3，3’，5，5’-四甲基联苯胺（简称TMB）是一种新型安全的辣根过氧化物酶显色底物，与传统的显色底物联苯胺、邻联甲苯胺及邻苯二胺等相比较，TMB具有检测灵敏度高、稳定性好等优点，而且使用安全。经动物试验和Ames细菌自动变异性试验结果表明，TMB为非致癌物和非致突变物。目前TMB已在逐步取代强致癌物联苯胺和其他致癌性的联苯胺衍生物，用于酶联免疫分析。
　　TMB的固体试剂分为非盐和盐酸盐两种形式，“TMB”（说明书下载1015）难溶于水，易溶于醇、二甲基亚砜和二甲基甲酰胺等有机溶剂。TMB盐酸盐易溶于水。
　　TMB最常用于酶联免疫（ELISA）和蛋白印迹（WB）。“TMB显色液(可溶性)”（说明书下载1001）在辣根过氧化物酶作用下产生蓝色可溶性产物，产物量与HRP浓度正相关，从而进行定量和定性免疫分析。“TMB显色液（沉淀性）”（说明书下载1003）在辣根过氧化物酶作用下产生的蓝色产物被显色液中的沉淀剂沉淀出溶液，附着于印迹膜上，不被冲洗掉，形成蓝色印迹。
　　TMB单组份显色液具有灵敏度高，稳定性强的优点，使用也极为方便，目前在酶联免疫分析实验中已普遍替代双组份A、B液。

　　　怎样使我的辣根酶标记抗体在工作浓度下稳定？
　　很多ELISA实验者因实验时现稀释酶标抗体感觉麻烦；很多生产商希望提供酶标抗体工作液为客户提供更多方便。“辣根过氧化物酶（HRP）稳定剂”（说明书下载2009）能够对大多数低浓度辣根酶标记抗体提供保护。
　　辣根过氧化物酶稳定剂可以作为酶标抗体稀释液的基础液使用，实验者根据需要添加白蛋白、动物血清、表面活性剂、防腐剂等，一般不影响稳定剂的活性。
　　辣根过氧化物酶稳定剂同时对辣根过氧化物酶和抗体提供保护作用，因此，也可以作为抗体稀释液使用。
　　由于抗体和酶标抗体自身的稳定性也起非常重要的作用，因此，不同的酶标抗体在此稳定剂中的稳定性会有差异，实验者应该对自己的酶标抗体进行预测定，以确定合适的酶标抗体稀释度。

　　　这么多种化学发光液我该怎么选？
　　化学发光技术近年来广泛应用于免疫分析。由于辣根酶标记物具有便宜、稳定的特点，在国内应用最为广泛。以鲁米诺为发光剂的化学发光技术目前国内应用最普遍。鲁米诺在增强剂和氧化剂存在时，在辣根过氧化物酶的作用下能持续数十分钟的稳定发光，并且发光强度也比没有增强剂的发光强度大幅度增加。
　　根据增强剂的种类和浓度不同，发光剂的浓度不同，以及发光液配方的优化不同，化学发光液有不同的发光强度，不同的平台期。
　　“化学发光液”（说明书下载1009）背景发光低，信噪比高，平台期长，适合于一般的酶联免疫分析，较TMB显色的ELISA的灵敏度提高1~2个数量级。
　　“超灵敏化学发光液”（说明书下载1010）发光强度比“化学发光液”高5~10倍，信噪比进一步提高。也可以作为ELISA底物。还可以做WB，高的发光值有利于胶片曝光。
　　“超灵敏化学发光液（用于WB）”（说明书下载1010a）有更高的发光值，但本底较高，适合于WB中胶片曝光。
　　在选择发光液时，还要考虑仪器的检测范围。好的发光仪检测范围宽，对发光液的适应性强。某些发光仪检测范围较窄，有的适合低值，有的适合高值，可根据需要选择发光液。